1、称呼的语气不同：欧尼桑是对兄长的尊称，称呼时是一种较为尊敬的语气；而欧尼酱是对兄长亲切的叫法，称呼时是一种较为亲昵的语气。

2、称呼的对象不同：欧尼桑既可以用来称呼自己的亲哥哥也可以用来称呼别人的哥哥，而欧尼酱一般只是称呼自己亲哥哥或关系比较好的哥哥。

3、偏重的人群不同：欧尼桑比较偏重成年人的口语；而欧尼酱比较偏重于孩子的口语。

欧尼桑和欧尼酱其实单从表达的意思上来说是没有什么太大的区别的，只不过在不同的场合或人群下称呼会有一定的改变。日语中除了欧尼桑和欧尼酱之外，像阿尼（别人称自己的哥哥）、阿尼ki （语气比较随意）、尼尼（语气比较亲昵）、尼桑（正常语气）、欧尼撒嘛（通常漫画或动漫中比较常见），这些都可以用来表达哥哥的意思。